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BL21 Star(DE3)pLysS菌株是收集生长在对数期的BL21 Star (DE3)pLysS菌，加入含有甘油的细菌冻存液制备而成。本甘油菌可以直接划平板或小量、大量培养。本菌株可以使用常规的2YT或LB培养基进行培养。

BL21 Star (DE3)pLysS菌株来源于BL21 (DE3)，含有rne131突变(RNaseE基因突变)，RNaseE基因的突变降低了内源RNase的积累，增强了菌株细胞内mRNA的稳定性，从而提高了异源蛋白的表达水平。

BL21(DE3)是BL21被λ噬菌体DE3溶原化的衍生菌株，在lacUV5启动子控制下可表达噬菌体T7 RNA聚合酶(相关基因序列已经整合到细菌染色体中)。IPTG可以诱导BL21(DE3)菌株中T7 RNA聚合酶的高表达，因此BL21(DE3)菌株适合受T7启动子调控的目的基因通过IPTG诱导表达。常见的pET系列原核表达载体中目的基因的表达都是受T7启动子调控的，因此都适合用BL21(DE3)作为宿主菌。

BL21 Star (DE3)pLysS菌株在BL21(DE3)基础上改造而成，主要适用于T7启动子表达载体(如pET系列)的高水平蛋白表达，同时含有大肠杆菌RNA聚合酶。

BL21(DE3)pLysS菌株携带pLysS，具有氯霉素抗性，可以表达能抑制T7 RNA聚合酶的T7溶菌酶，从而可以抑制T7 RNA聚合酶在目的蛋白被IPTG诱导前的本底表达，即导致本底性的外源重组蛋白的表达被有效抑制。这种情况下特别适合于影响细胞生存和活力的外源毒性蛋白的表达。

BL21 Star (DE3)pLysS菌株与BL21(DE3)pLysS相比，含有rne131突变(RNaseE基因突变)，导致细胞内RNaseE缺少，细胞内mRNA稳定性提高，从而可以实现异源蛋白的高表达。BL21 Star (DE3)pLysS菌株主要适用于T7启动子表达载体(如pET系列)的高水平蛋白表达，同时含有大肠杆菌RNA聚合酶，也可用于非T7启动子表达载体(pGEX、pMAL等)的蛋白表达。由于BL21 Star (DE3)菌株的异源基因基础表达水平较高，所以不适合毒性蛋白的表达。BL21 Star (DE3)pLysS菌株携带pLysS，具有氯霉素抗性。pLysS含有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶可与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的蛋白表达。pLysS质粒含有p15A复制起始子，可以和含有pUC或pBR322等复制起始子的质粒兼容。

• 使用本甘油菌时可以不必完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加细菌的活力会逐渐下降。在没有结冻的情况下，菌体会逐渐沉淀至管底，请务必注意适当混匀后使用。
  
• 为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板然后再挑单克隆菌落进行后续操作。
  
• 本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 划平板接种：
  取出BL21 Star(DE3)pLysS菌株置于冰上，并置于超净台内，后续操作都在超净台内操作。
  
  • 用镊子和塑料枪头操作：镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的200μL塑料枪头，蘸取少量甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料枪头，以尽量和2YT或LB平板接近平行的角度，在含34μg/mL氯霉素的2YT或LB平板上连续作S形或Z形划动，再用一无菌的200μL塑料枪头，在原先的划线上以90°或120°角，再在2YT或LB平板上连续作S形或Z形划动。通常换枪头重复操作2～3次即可。37℃倒置培养过夜。
    
  • 用接种环操作：将接种环在酒精灯上略略烧一下，使接种环处于无菌状态。微冷后，蘸取少量甘油菌，在含34μg/mL氯霉素的2YT或LB平板上连续作S形或Z形划动。把接种环再烧一下，微冷后，在原先的划线上以90°或120°角，再在2YT或LB平板上连续作S形或Z形划动。通常用接种环重复操作2～3次即可。37℃倒置培养过夜。
• 直接培养：
  取出甘油菌置于冰上，并置于超净台内，后续操作都在超净台内操作。把镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的塑料枪头或牙签，蘸取甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料枪头或牙签放到装有3mL 2YT或LB (含34μg/mL氯霉素)的细菌培养试管内或装有100mL或更大体积2YT或LB (含34μg/mL)氯霉素的细菌培养瓶内。37℃，约200rpm培养过夜。
  
• 感受态细菌的制备：
  可以使用感受态细胞快速制备试剂盒、高效感受态细胞制备试剂盒进行感受态细胞的制备。